Skip to content

wlasciwosci jagody czarnej

2 miesiące ago

589 words

Te ostatnie badania sugerowały, że lamin C. ASO może mieć podwójne korzyści dla pacjentów z HGPS. bezpośrednia korzyść poprzez obniżenie wytwarzania transkrypcji progerinowych i bardziej pośrednią korzyść ze zwiększenia produkcji laminatu C, a tym samym zmniejszenia toksycznego działania progeryny. Podsumowując, zidentyfikowaliśmy 30-nt odcinek w eksonie 11 LMNA, który jest ważny dla regulacji składu mRNA laminatu C / prelaminy A. Wykazaliśmy, że ASO, które wiążą się z tą sekwencją, przechylają równowagę produkcji LMNA bardziej w kierunku laminatu C, a mniej w kierunku laminatu A. Badania mechanistyczne sugerują, że Laminowane ASC z LLNA zmniejszają wiązanie SRSF2 do pre-mRNA egzonu 11 LMNA, a tym samym zmniejszają produkcję transkryptów prelaminy A. Laminowany C. ASO zmniejszał ekspresję laminatu A u myszy typu dzikiego, a także zmniejszał poziomy progerin i choroby patologicznej w aorcie u myszy LmnaG609G / G609G. Nasze badania sugerują, że celowanie w alternatywne splicing mRNA LMNA może okazać się bezpieczną i skuteczną strategią leczenia HGPS i wszystkich innych chorób wywołanych przez mutacje prelaminy A. Metody Dodatkowe szczegóły podano w metodach dodatkowych. Komórki. Pierwotne MEF zostały przygotowane z embrionów dzikiego typu E13.5 typu dzikiego lub zarodków Srsf2fl / fl po krzyżowaniu krzyżowym myszy Srsf2fl / +. Komórki hodowano w DMEM (Gibco) zawierającym 10% FBS (Hyclone) z mM nieistotnymi aminokwasami (Gibco), mM pirogronianem sodu (Gibco), 2 mM glutaminą (Gibco), 10 jednostkami / ml penicyliny i 10 ug / ml streptomycyny (Gibco). Ludzkie fibroblasty HGPS (AG11513, AG1972, AG11498), ludzkie fibroblasty dzikiego typu (AG2522, AG2429), ludzkie chondrocyty (402-05a), ludzkie komórki mięśni gładkich aorty (PCS-100-012), ludzkie osteoblasty (CRL-11372) Komórki HeLa i komórki HEK293 otrzymano z ATCC lub z repozytorium komórek Coriell i hodowano zgodnie z instrukcjami dostawców. Unieśmiertelniona HTERT linia komórkowa HGPS 75-8 została dostarczona przez Junko Oshimę (University of Washington, Seattle, Washington, USA) (41). Transfekcje ASO. ASO zostały zsyntetyzowane przez Ionis Pharmaceuticals i nazwane na podstawie ich miejsca wiązania w eksonie (E) lub intronie (I). Na przykład, E11-31 jest ASO, który wiąże się z eksonem 11, zaczynając od nt 31 egzonu 11. Komórki wysiewano na 6- lub 12-studzienkowe płytki i pozostawiano do przylgnięcia przez noc. Fibroblasty przemywano pożywką Opti-MEM I (Invitrogen), transfekowano ASO (31 nM) z 2 .l / ml Lipofectamine 2000 (Invitrogen), a następnie inkubowano w 37 ° C. Po 6 godzinach pożywkę transfekcyjną zastąpiono świeżą pożywką hodowlaną. W niektórych przypadkach drugą transfekcję przeprowadzono 2 dni później, a komórki hodowano przez 2 dodatkowe dni przed izolowaniem ekstraktów RNA i białka. Wszystkie sekwencje ASO wymieniono w Tabeli 1. Suplementacja siRNA. Ludzkie fibroblasty dzikiego typu i HGPS wysiewano na 6- lub 12-studzienkowe płytki i pozostawiano do przylgnięcia przez noc. Fibroblasty przemyto pożywką Opti-MEM I (Invitrogen) i transfekowano siRNA (25 nM) za pomocą 2 ul / ml Dharmafect I (Thermo Scientific) w 37 ° C przez 6 godzin. Pożywkę transfekcyjną usunięto i zastąpiono świeżą pożywką hodowlaną. Drugą transfekcję przeprowadzono 2 dni później, a komórki hodowano przez dodatkowe 2 dni przed izolowaniem ekstraktów RNA i białek. Transfekcje przeprowadzono za pomocą następujących siRNA z Thermo Scientific: LMNA (L-004978-00), SRSF1 (L-018672-01), SRSF2 (L-019711-00) lub SRSF6 (L-016067-01). Transdukcja adenowirusa. MEF Srsf2fl / fl wysiano na 6-studzienkowe płytki i pozostawiono do przylgnięcia przez noc. Wirus Adeno-Cre lub adeno-LacZ (wektor przeniesienia genów, University of Iowa) dodano przy 2000 MOI i inkubowano w 37 ° C przez 3 dni przed izolacją RNA i białka. Western blot. Rozpuszczalne w moczniku ekstrakty białkowe z komórek i tkanek zostały przygotowane zgodnie z wcześniejszym opisem (19)
[więcej w: kolano budowa, kalprotektyna, jarmuż właściwości ]

0 thoughts on “wlasciwosci jagody czarnej”