Skip to content

szybkie i dobre ciasto na wielkanoc

4 miesiące ago

646 words

Aby zbadać wpływ ASO E11-31 na patologię aorty, leczono myszy LmnaG609G / G609G za pomocą ASO E11-31 lub zaszyfrowanego ASO kontrolnego przez 3 miesiące, począwszy od miesiąca życia. W aortach myszy LmnaG609G / G609G obserwowaliśmy laminat C i duże ilości ekspresji progerin, ale tylko niewielkie ilości laminatu A, co wskazuje, że głównym produktem allelu LmnaG609G jest progeryna (Figura 6C i Suplementowa Figura 4A). Patologia aortalna u myszy LmnaG609G / G609G leczonych zaszyfrowaną ASO była ciężka, identyczna jak u myszy nieleczonych, z utratą przyśrodkowych komórek mięśni gładkich i ciężkim przypadkowym zwłóknieniem, co oceniono przez zmniejszenie barwienia cytoplazmatycznego w podłożu i zwiększone wybarwienie kolagenu w adventitia. Przeciwnie, u myszy leczonych ASO E11-31 poziomy progeryny, znormalizowane względem aktyny, zmniejszyły się o ponad 50% w porównaniu z poziomami u myszy leczonych za pomocą kodowanej ASO (Figura 6C i Suplementacja Figura 4, A i B) , a patologia aortalna uległa znacznej poprawie podczas badania aorty wstępującej, z których wszystkie miały mniej przynależne włóknienie i bardziej gładkie komórki mięśniowe, jak oceniano przez barwienie trichromem Massona (Figura 6D i Suplementowa Figura 4C). Dyskusja Ekspresja Lamin typu A jest niezbędna do przeżycia po urodzeniu zarówno u ludzi (36), jak iu myszy (12), ale nie ma wymogu syntezy zarówno laminatu A, jak i laminatu C (13, 14). Jedynie myszy Lamin C. (13) są wolne od choroby i mają normalną długość życia. Brak wykrywalnej patologii u tych myszy, w którym cały wynik genu Lmna jest kierowany do laminatu C, podniósł możliwość bezpiecznego leczenia HGPS i wszystkich innych chorób prelamin A przez przechylenie równowagi ekspresji LMNA w kierunku laminowania Produkcja C. Aby zbadać wykonalność tego podejścia, zbadaliśmy mechanizmy kontrolujące splatanie LMNA i udało nam się zidentyfikować odcinek 30-nt w eksonie 11 LMNA, który reguluje składanie lamin C / prelaminę A. Kierowanie tego regionu za pomocą laminatu C . ASO (np. E11-31) zmniejszało poziomy mRNA prela- miny A i poziomy białka L1 w mysich i ludzkich liniach komórkowych. Godne uwagi jest to, że traktowanie ludzkich fibroblastów HGPS za pomocą laminatu C. ASO zmniejszyło poziomy transkrypcji progeriny i białka o> 70%. Sekwencja egzonów 11 kierowana przez ASO E11-31 zawiera potencjalne miejsca wiązania dla 3 różnych ESE, ale tylko splicing laminowany C / prelaminą pod wpływem SRSF2. Obniżenie poziomów SRSF2 w komórkach ludzkich przez knockdown siRNA lub inaktywację mysiego Srsf2 przez rekombinację Cre przesunęło wyjście genu w kierunku laminatu. Badania degradacji RNA ujawniły, że SRSF2 wiąże się z RNA eksonem 11 (obejmującym sekwencję ASO E11-31), i inaktywacja 2 miejsc wiązania SRSF2 w tej sekwencji zredukowała transkrypty prelaminy A w badaniach konstruktu reporterowego. Zgodnie z tymi wynikami in vitro zaobserwowaliśmy przesunięcie w kierunku większej syntezy L-C w hepatocytach z myszy pozbawionych hepatocytów SRSf2. Wreszcie, traktowanie myszy typu dzikiego ASO E11-31 przesunęło produkcję Lmna w wątrobie w kierunku laminatu C i traktując myszy LmnaG609G / G609G z ASO E11-31 zmniejszonymi poziomami progeriny w aorcie i zmniejszoną patologią aorty. Sekwencje regulatorowe eksonów 11 genów A / C laminatu ludzkiego i mysiego zidentyfikowane w naszych badaniach są prawie identyczne (97% identyczności sekwencji). Fakt, że te sekwencje znajdują się w praktycznie tej samej pozycji w stosunku do 3. strona splice wspiera ideę, że sekwencje te odgrywają rolę w splicingu (37). Zgodnie z przewidywaną strukturą drugorzędową sekwencji pre-mRNA egzonu 11 LMNA, zaproponowaną przez Tazi i współpracowników (38), region regulacyjny 30 nt nakłada się na 2 struktury łodygi macierzystej rozdzielone krótkim odcinkiem niesparowanego nt. Ponieważ łączenie białek regulatorowych preferencyjnie wiąże się z jednoniciowym RNA (39), można by przewidzieć, że aktywne miejsce ESE będzie zlokalizowane w niesparowanym nt między strukturami 2-pętlowymi
[podobne: olx grójec, jak szybko obniżyć ciśnienie, ale gratka ]

0 thoughts on “szybkie i dobre ciasto na wielkanoc”