Skip to content

szpital oświęcim kardiologia

4 miesiące ago

669 words

Na podstawie naszych ustaleń, że komórki Farage zinternalizowały w przybliżeniu 15 ng / 105 komórek w nasyceniu (Figura 5A) i wydzielały około 12 ng / ml pożywki / 105 komórek 24 godziny po usunięciu ze źródła C3, doszliśmy do wniosku, że niestymulowane komórki Farage wydzielają w przybliżeniu 80% C3 (H2O), a zatem może ulegać rozkładowi lub metabolizmowi do około 20%. Aby określić, czy komórki pierwotne rozpraszają C3 przechowuje się w ramce czasowej podobnej do tej w komórkach hodowanych, komórki T CD4 + analizowano przez WB dla C3 po ich usunięciu z krwi obwodowej. Ze względu na czas potrzebny do wyizolowania limfocytów T CD4 + (~ 3 godziny), straty C3 w każdym punkcie czasowym nie mogą być bezpośrednio porównane z komórkami Jurkat (Figura 5D). Jednakże, zgodnie z tym, co stwierdzono z tymi ostatnimi, komórki T CD4 + zawierały około 30% wykrywalnego C3 przez godzinę i około 5% przez 24 godziny (Figura 5G). Dane te wskazują, że zarówno komórki pierwotne, jak i hodowane linie komórkowe dość szybko straciły swoje zasoby C3 (H2O) po usunięciu ze źródła C3. Potwierdza to koncepcję, że komórki in vivo są internalizujące homeostatycznie, przetwarzające i wydzielające C3 (H2O). Przetwarzanie C3 (H2O) przez białka kofaktorowe. Na podstawie naszego odkrycia, pokazanego na ryc. 5, wykazującego, że komórki pobierają C3 (H2O), uwalniając około 80% nietkniętych i zatrzymujących około 20%, badaliśmy dalej los zinternalizowanego / zatrzymanego białka. Rozważono dwie możliwości. Po pierwsze, C3 (H2O) można inaktywować i degradować podobnie do regulacji C3 (H2O), która osadza się na błonie komórkowej. W tym ostatnim przypadku inaktywacja (tj., IC3 [H2O]) wynika z aktywności kofaktora (CA), w której rozszczepienie jest pośredniczone przez czynnik plazmowy I (FI) wraz z białkiem kofaktora (takim jak CD46 na powierzchni komórki lub FH z osocze). Zgodnie z tą możliwością, obserwowaliśmy fragmenty cięcia przez WB w komórkach Farage inkubowanych z oczyszczonym C3 w obecności surowicy zubożonej w C3 przez dłuższe okresy czasu (Suplementalna Figura 5). Drugi możliwy los zinternalizowanego C3 (H2O) byłby źródłem generowania C3a (podobnie jak w naszych wcześniejszych odkryciach, pozycja 4) przez wewnątrzkomórkową proteazę, taką jak CTSL. Aby dokładniej zbadać pierwszą możliwość, ustaliliśmy przez WB, że komórki Farage nie posiadają endogennych zapasów FH lub FI (nie pokazano). Następnie rozważaliśmy możliwość, że komórki FH i FH mogą również zostać wchłonięte, szczególnie w świetle niedawnego odkrycia, że komórki apoptotyczne przejmują FH (7). W związku z tym inkubowaliśmy oczyszczone składniki z komórkami oraz płukano i przeprowadzano WB na lizatach komórkowych. FI zostało wchłonięte przez komórki Farage (Figura 6A) samoistnie i podczas inkubacji z FH. Wzięto również FH (Figura 6B). Analiza frakcji subkomórkowych, przygotowanych z komórek Farage inkubowanych z C3 (MA), FH i FI przez WB, wykazała FH w błonie i rozpuszczalne frakcje jądrowe (Figura 6B). Są to białka FH-podobne, fragmenty FH lub prążki reagujące krzyżowo. W szczególności, zidentyfikowaliśmy przypuszczalną sekwencję lokalizacji jądrowej (NLS) obejmującą białka kontrolne dopełniacza CCP1 i CCP2 w FH (LRKCQKRPCGH). Analiza FACS nie obserwowała FH na błonie komórkowej (nie pokazano). Tak więc, wykazaliśmy FH i FI w lizatach komórek Farage po egzogennym dodawaniu do hodowli komórkowych. Nasze wyniki wskazują, że nawet komórki nieapoptotyczne mogą zająć nie tylko FH, ale także FI. Figura 6C3 (H2O) przetwarzana przez białka kofaktorów. Lizaty całych komórek (A i B) i frakcje subkomórkowe (B) przygotowano z komórek Farage inkubowanych z C3 (MA), z lub bez FH i FI, i analizowano za pomocą WB z kozim anty-FI pAb (A) lub kozim pAb anty-FH (B). Warunki nieredukujące. FH, 20 ng; ekwiwalenty komórek, 3 x 105. Reprezentatywne 2 niezależne eksperymenty. (C) Komórki Farage inkubowano przez 15 minut z 15 .g / ml samego C3 (MA) lub plus FI (I) (2 .g / ml) lub FI i FH (H) (25 .g / ml)
[podobne: klasterowe bóle głowy, klasyfikacja chorób, kolano budowa ]

0 thoughts on “szpital oświęcim kardiologia”