Skip to content

stawianie baniek próżniowych

4 miesiące ago

15 words

Wyświetlane jest SD. Wszystkie dały statystycznie istotne różnice w porównaniu z kontrolą (P <0,01, test t). (B) Modulowanie alternatywnego splicingu LMNA za pomocą ASO E11-31 w wielu typach komórek. Fibroblasty ludzkiej skóry (SKF, klon AG2492), komórki HepG2, komórki HeLa, osteoblasty (OsteoB), chondrocyty (Chond) i komórki mięśni gładkich (SMC) transfekowano samym ASO E11-31 lub samym odczynnikiem transfekcyjnym. Po 2 dniach poziomy transkrypcji prelaminy A i laminatu C mierzono za pomocą qRT-PCR i wyrażano w stosunku do kontroli typu nemplate (nastawionej na wartość 1,0). (C) Zmniejszenie poziomów białka L A z ASO E11-31 w kilku typach komórek ludzkich. Te same typy komórek opisane w B transfekowano samym ASO E11-31 lub samym odczynnikiem transfekcyjnym. Po 3 dniach ekspresję laminatu A i C zmierzono metodą Western blotting. Poziomy aktyny mierzono jako kontrolę obciążenia. Ekspresję białka laminy oznaczono ilościowo i wyrażono w stosunku do kontrolki typu nemplate (nastawionej na wartość 1,0). (D) ASO E11-31 obniża poziomy progerin w komórkach HGPS. Podwójne studzienki komórek HGPS transfekowano jeden raz ASO E11-31. Komórki zebrano 1. 5 dni później, a ekspresję laminatu A, laminatu C i progeryny zmierzono metodą Western blotting. Poziomy aktyny mierzono jako kontrolę obciążenia. Dane są wyrażane w odniesieniu do komórek traktowanych zaszyfrowaną ASO (ustawioną na wartość 1,0). Śladowe ilości transkryptów progerinowych (<1% ilości pełnej długości transkryptów prelaminy A) można wykryć w ludzkich komórkach dzikiego typu (31, 32), co jest konsekwencją śladowego wykorzystania tego samego miejsca donorowego składania eksonów 11 stosowanego w HGPS. Chociaż ASO E11-31 wiąże się z sekwencjami w przybliżeniu 70 nt powyżej mutacji HGPS w kodonie 608 (c.1824C> T), możliwe jest, że Laminowane C. ASO mogą zwiększyć wykorzystanie miejsca donorowego egzonu 11 HGPS i wynik w większych ilościach transkrypcji progerinowych. Aby rozwiązać ten problem, zbadaliśmy transkrypty prelamin A za pomocą RT-PCR w komórkach, które zostały transfekowane ASO E11-31 lub zaszyfrowaną kontrolną ASO. Zgodnie z wcześniejszymi badaniami (31, 32), śladowe ilości transkryptów progerinowych można było wykryć w komórkach ludzkich, które transfekowano rozmazanym kontrolnym ASO (Suplementowa Figura 2C), a niskie poziomy nie dawały wykrywalnego białka progerynowego przez Western blotting ( patrz Figura 1C i Figura 2C). Ślady ilości transkryptów progerinowych zidentyfikowano również w komórkach traktowanych ASO-E11-31, ale poziomy transkryptów w tych komórkach były podobne do poziomów stwierdzonych w komórkach transfekowanych kontrolnym ASO (lub być może nawet niższym). Tak więc, Laminowane ASC nie zwiększają wykorzystania miejsca donorowego HGPS w normalnych komórkach. Drugi bardzo słaby produkt RT-PCR był wykrywalny w komórkach transfekowanych E11-31 (3 i w 2 z 3 komórek transfekowanych kontrolnym ASO. Identyczność produktu śladowego nie została zidentyfikowana przez sekwencjonowanie DNA, ale jego wielkość (~ 77 pz) była zgodna z transkryptem pozbawionym sekwencji eksonów 11. Niskie poziomy transkryptu prelamin A (i niskiego poziomu białka A) u myszy typu dzikiego i ludzkich fibroblastów transfekowanych ASO E11-31 skłoniły nas do przetestowania skuteczności ASO E11-31 w ludzkich fibroblastach HGPS z c.1824 (C > T) mutacja. Fibroblasty HGPS transfekowano ASO E11-31, a ekstrakty komórkowe przygotowano do 5 dni później do analizy Western blot z przeciwciałem, które wiąże się z końcem aminowym laminatu A (region wspólny z laminatem C, progeriną i laminatem A). Jeden dzień po transfekcji poziom L i A białka progerynowego był niższy w komórkach traktowanych ASO E11-31a niż w komórkach traktowanych kontrolnym ASO i Laminą A, a poziomy progeriny pozostawały niskie przez dzień 4 do 5 (Figura 2D). Poziomy Lamin C nie zmieniały się w pierwszym dniu po transfekcji ASO E11-31, ale poziomy L C były wyższe w dniu 2 i osiągnęły najwyższy poziom w dniu 3.
[więcej w: zimbra gratka, kaki kalorie, kłykciny kończyste objawy ]

0 thoughts on “stawianie baniek próżniowych”