Skip to content

sienna 60 warszawa przychodnia

4 miesiące ago

680 words

Wpływ ASO E11-31 na ekspresję laminatu A / C w fibroblastach HGPS korelował z dawką ASO (Suplementowa Figura 2D) i obserwowano w każdej z testowanych linii komórkowych fibroblastów HGPS (75-8, AG11513, AG1972, i AG11498; Dodatkowa Figura 2, E i F). Zredukowana ekspresja laminatu A / progeriny w fibroblastach HGPS traktowanych ASO E11-31 (3 była również widoczna w immunocytochemii. W tych badaniach komórki transfekowane ASO barwiono zarówno przeciwciałem z laminatu A (zielonym), które rozpoznaje laminat A i progerynę, jak i przeciwciało z laminatu C (czerwone). W komórkach HGPS, które transfekowano mieszaną ASO, większość jąder komórek była żółta lub pomarańczowa, co odzwierciedla fakt, że laminat A / progeryna i laminat C są wyrażane w przybliżeniu w podobnych ilościach (Figura 3A). W fibroblastach potraktowanych ASO E11-31 (3, wyniki były zupełnie inne. Podczas gdy Lamin C ulegał ekspresji w jądrach wszystkich komórek, barwienie Lamin A było minimalne w niektórych komórkach, co skutkowało wieloma więcej czerwonymi jądrami w scalonym obrazie. Zmiany w ekspresji laminatu A i laminatu C w poszczególnych komórkach określano ilościowo przez przetwarzanie obrazu i wykreślano. W komórkach kontrolnych intensywność barwienia dla przeciwciał LI i C była zazwyczaj ściśle dopasowana (tj. Komórki o niskim wyrobie z laminatu A miały zwykle niskie poziomy C w laminacie, a komórki o wysokich poziomach laminatu A miały zazwyczaj wysokie poziomy C-laminatu; Figura 3B). Jednak po transfekcji ASO E11-31 zaobserwowano łatwy do wykrycia wzrost liczby komórek, które wyrażały wysoki poziom laminatu C i niski poziom laminatu A / progeryny (Figura 3, A i B). Ryc. 3ASO niższe poziomy laminatu A i zmniejszają częstość występowania nieprawidłowości kształtu jądra w fibroblastach HGPS. (A) Immunocytochemia pokazująca zwiększoną liczbę komórek wyrażających więcej L C laminatu niż po ASO E11-31. Ludzkie fibroblasty HGPS (klon 11513) transfekowano raz ASO E11-31. Po 5 dniach komórki poddano obróbce pod kątem mikroskopii immunofluorescencyjnej z przeciwciałem z laminatu A, które wiąże laminat A i progerynę (zielony) i przeciwciałem z laminatu C (czerwonym). Komórki transfekowane zaszyfrowaną ASO służyły jako kontrola. Po transfekcji ASO E11-31 ekspresja laminatu A została znacznie zmniejszona w wielu komórkach (grot strzałki). Pasek skali: 50 .m. (B) Pomiary ilościowe wykazujące większą liczbę komórek wyrażających więcej C niż laminat A w komórkach traktowanych ASO E11-31. Kontrolne komórki traktowane ASO (białe kwadraty) wyrażały w przybliżeniu równoważne ilości laminatu A i C. Po obróbce ASO E11-31 (czerwone kwadraty) nastąpił wzrost liczby komórek, które wyrażały więcej L laminatu niż laminat A. Lamin C poziomy skalowano do poziomów mierzonych w komórkach kontrolnych; w związku z tym najwyższe poziomy dla laminatu C były ograniczone do około 85 procent. (C) ASO E11-31 zmniejsza liczbę nieprawidłowo ukształtowanych jąder w komórkach HGPS. Ocena kształtu jądra po transfekcji ASO E11-31. Dwie linie komórkowe fibroblastów HGPS (klony 1972 i 11513) traktowano jednokrotnie ASO E11-31 lub zaszyfrowaną ASO. Po 5 dniach kształt jądrowy został oceniony przez dwóch obserwatorów zaślepionych na grupę leczoną (n = 2 na grupę). Zniekształcone jądra komórkowe są cechą charakterystyczną komórek HGPS, a częstotliwość zniekształconych jąder zależy od ilości ekspresji progeriny (20). Ponieważ ASO E11-31 zmniejsza ekspresję progeriny w fibroblastach HGPS, podejrzewaliśmy, że ASO również zmniejszyłoby zniekształcone jądra. Rzeczywiście, w dwóch zbadanych liniach komórkowych fibroblastów HGPS (AG1972 i AG11513) częstotliwość zniekształconych jąder była niższa w komórkach transfekowanych ASO E11-31 (zbliżając się do bardzo niskich poziomów zniekształconych jąder w komórkach typu dzikiego; Figura 3C; P < 0,05). Ponieważ ASO E11-31 zmieniło wzór łączenia w laminat C / prelaminę A, podejrzewaliśmy, że sekwencje eksonów 11 odpowiadające ASO E11-31 (i innym. Laminowanym C. ASO.) Mogą zawierać miejsca wiązania dla eksonicznego wzmacniacza splicingu (ESE) białka [więcej w: kiełki słonecznika, olx leżajsk, klasterowe bóle głowy ]

0 thoughts on “sienna 60 warszawa przychodnia”