Skip to content

rozpiska na siłownie 3 dni

2 miesiące ago

73 words

Reprezentant 5 niezależnych eksperymentów. Wewnątrzkomórkowa lokalizacja C3 (H2O). Jednym powszechnym mechanizmem internalizacji ligandu jest endocytoza, w której pośredniczą klatryna. Skutkuje to lokalizacją ładunku we wczesnych endosomach. Aby podążać ścieżką zinternalizowanego C3 (H2O), przeprowadziliśmy kinetyczną ocenę obciążenia w komórkach ARPE-19 (Figura 3A) i limfocytach T CD4 + (Suplementowa Figura 2), wykorzystując C3-DL488, marker dla wczesnych endosomów (Rab5) i mikroskopia konfokalna. Natychmiast po ekspozycji na C3-DL488 (<1 minuta), większość C3 została wykryta we wzorze sugerującym związek z błoną plazmatyczną. W ciągu 15 minut po załadowaniu, C3-DL488 kolokalizowano do wczesnych endosomów, charakterystycznych dla endocytozy, w której pośredniczy kanalina. Godzinę po załadowaniu C3-DL488, nie było już kolokacji z Rab5 i część z C3-DL488 została utracona, zgodnie z naszymi późniejszymi wynikami demonstrującymi recykling obciążonego C3 (H2O) (patrz Figura 5G). Figura 5 Charakteryzacja recyklingu C3 (H2O). (A) Ilość wychwytu C3 (H2O) oceniono za pomocą WB i określono ilościowo za pomocą densytometrii. Komórki Farage inkubowano przez godzinę ze wzrastającymi stężeniami C3 (MA) w 10% zubożonej w C3 surowicy. Densytometria została użyta do określenia stężenia C3 (MA) pobranego na 105 równoważników komórek. (B) Kinetykę obciążenia określono przez inkubację komórek Farage z 5 .g / ml C3 (MA) w celu zwiększenia długości czasu i analizowano przez WB. Densytometria została użyta do oceny ilości C3 (H2O) obecnego w komórkach w każdym punkcie czasowym. Inset to reprezentatywna WB. (C = E) Kinetykę utraty C3 (H2O) z ustalonych zapasów oceniono w komórkach Farage (C), Jurkat (D) i ARPE-19 (E). Komórki inkubowano przez godzinę z 20 .g / ml C3, przemywano i platerowano pod nieobecność C3 (podłoża normalnego wzrostu) we wskazanych punktach czasowych. Badanie densytometryczne WB zastosowano do określenia ilości C3 (H2O) pozostającego w komórkach w porównaniu z komórkami poddanymi lizie natychmiast po załadowaniu. (F) Ilość C3 (H2O) uwolnionego z załadowanych (załadowanych C3) lub nieobciążonych (nieobciążonych) komórek Farage do supernatantu oceniano za pomocą WB we wskazanych punktach czasowych. (G) Oceniono kinetykę utraty C3 (H2O) ze świeżo wyizolowanych limfocytów T CD4 +, które zawierały ładunki C3 (H2O) załadowane in vivo. Izolowane limfocyty T CD4 + wysiano w kompletnej pożywce zawierającej 10% FBS i 25 U / ml rhIL-2, a lizaty komórkowe przygotowano we wskazanych punktach czasowych. Badanie densytometryczne zastosowano do określenia ilości C3 (H2O) pozostającego w komórkach w porównaniu z komórkami poddanymi lizie natychmiast po izolacji. (A. G) Dane (średnia . SD) pochodzą z 2 niezależnych eksperymentów. Aby wzmocnić obserwację, że C3 (H2O) zostało internalizowane, przeprowadziliśmy badania kolokalizacji z markerem powierzchniowym CD46 w 15 minut po ładowaniu C3 (H2O). Nie wykryliśmy kolokalizacji z markerem błony komórkowej CD46, potwierdzającym wewnątrzkomórkowe położenie naładowanego C3 (H2O) (dodatkowa Figura 3). Dodatkowo wykonano cytometrię przepływową z kozim pAb do C3 na świeżo izolowanych limfocytach T CD4 + i wykryto wewnątrzkomórkową C3 (H2O), ale minimalną C3, na błonie plazmatycznej (Figura 3B). Dane te dodatkowo ustalają, że linie komórkowe mogą szybko się ładować. C3 (H2O) ze źródła egzogennego do wnętrza komórki i, gdy C3 (H2O) jest przenoszone do komórki, migruje we wczesnych endosomach. Ponadto wykrywanie C3 (H2O) w pierwotnych komórkach ludzkich, ale nie w hodowanych ludzkich liniach komórkowych, wskazuje, że komórki in vivo nieustannie pobierają, przechowują i przetwarzają C3 (H2O) pochodzące z osocza i / lub środowiska śródmiąższowego. 2-niezależny od 2MR wychwyt C3 (H2O). Ponieważ doniesiono o wychwycie C3MH (H2O) przez ludzkie fibroblasty (15), oceniliśmy jego ekspresję na liniach komórkowych użytych w tym badaniu. [przypisy: kardiowersja elektryczna, kminek właściwości, kaspofungina ]

0 thoughts on “rozpiska na siłownie 3 dni”