Skip to content

Rekonstrukcja rogówki z wytworzonymi tkankami arkuszy komórek składających się z autologicznego doustnego nabłonka błony śluzowej czesc 4

2 miesiące ago

499 words

Doustne komórki nabłonkowe oddzielono od tych komórek warstwy odżywczej podczas hodowli z wstawkami kultury komórkowej reagującymi na temperaturę. Potwierdziliśmy, że wielowarstwowe arkusze komórek były wytwarzane tylko w obecności komórek 3T3 w układzie hodowli. Po hodowli in vitro przez 14 dni zebrano warstwy komórek nabłonka (średnica 23,4 mm) przez obniżenie temperatury do 20 ° C. W przypadku testów tworzenia kolonii, zastosowano traktowanie trypsyną i EDTA w celu wyizolowania pojedynczych komórek z nabłonka śluzówki jamy ustnej. Komórki zliczono, posiano na płytki hodowlane (średnica 35 mm, Becton Dickinson) i hodowano z warstwami odżywczymi potraktowanymi mitomycyną C. Po hodowli przez 10 do 12 dni, naczynia utrwalono i wybarwiono rodaminą B. Tworzenie kolonii w całości naczynie przesiano pod mikroskopem preparatywnym.
Immunohistologia
Krioseksje z arkuszy komórek zostały wybarwione immunologicznie monoklonalnymi przeciwciałami anty-keratynowymi 3 (AE5, Progen Biotechnik), przeciwciałami przeciwko integrynie .1 (P5D2, Santa Cruz Biotechnology) lub przeciwciałami anty-p63 (4A4, Santa Cruz Biotechnology) i znakowanymi izotiocyjanianem fluoresceiny lub wtórne przeciwciała znakowane rhodaminą (Jackson ImmunoResearch Laboratories). Jądra były pokrywane Hoechst 33342 (Molecular Probes) lub jodek propidyny (Sigma). Zabarwione komórki obserwowano za pomocą konfokalnej laserowej mikroskopii skaningowej (LSM-510, Zeiss). To samo stężenie odpowiadającej, normalnej nieswoistej IgG dostarczyło kontrole negatywne, a natywne tkanki rogówki ludzkiej i tkanki kończyn zostały użyte jako kontrole pozytywne.
Transplantacja komórek w oczy
Ryc. 2. Ryc. 2. Procedury przeszczepiania tkankowo-autologicznych komórek nabłonka w tkankach. Przed zabiegiem całą powierzchnię rogówki pokryto tkanką spojówkową z neowaskularyzacją (panel A). W panelu B tkanka spojówki nad rogówką jest chirurgicznie usuwana w celu ponownego określenia przezroczystego zrębu rogówki. Następnie arkusz komórek nabłonkowych poddanych obróbce tkankowej zbiera się z wkładki hodowlanej reagującej na temperaturę za pomocą wspornika w kształcie doniczki ([kwadraty czarno-białe] panelu C) i umieszcza na zrębie podścieliska (Panel D) . Arkusz przylega do podścieliska rogówki w ciągu kilku minut bez szwów, a wspornik jest usuwany (panel E), pozostawiając arkusz komórek na zrębie (panel F). Klip wideo jest dostępny wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org.
Usunęliśmy bliznę spojówkowo-spojówkową z rogówki do 3 mm na zewnątrz rąbka, aby ponownie zidentyfikować zrąb rogówki (ryc. 2 i klip wideo, dostępny z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org). Następnie, zebrany arkusz autologicznych komórek nabłonka śluzówki jamy ustnej umieszczono bezpośrednio na odsłoniętym przezroczystym zrębie zrębu, jak opisano wcześniej. 6,23 Nie były wymagane żadne szwy. Przeszczepioną powierzchnię rogówki pokryto następnie miękką soczewką kontaktową w celu ochrony podczas gojenia. Po operacji miejscowe antybiotyki (0,3 procent ofloksacyny) i steroidy (0,1 procent betametazonu) początkowo nakładano cztery razy dziennie, a następnie zwężano do trzech razy dziennie. W pierwszym tygodniu po operacji betametazon (1 mg na dobę) podawano doustnie w celu zmniejszenia zapalenia pooperacyjnego
[hasła pokrewne: cienki kał, profilaktyka przeciwzakrzepowa w ortopedii, pleuroskopia ]
[więcej w: olx grójec, kaspofungina, kolano budowa ]

0 thoughts on “Rekonstrukcja rogówki z wytworzonymi tkankami arkuszy komórek składających się z autologicznego doustnego nabłonka błony śluzowej czesc 4”