Skip to content

Rekonstrukcja rogówki z wytworzonymi tkankami arkuszy komórek składających się z autologicznego doustnego nabłonka błony śluzowej cd

3 miesiące ago

607 words

Oceny efektów wizualnych przeprowadzali badacze, którzy nie byli zaangażowani w wykonywanie procedur i nie zostali poinformowani o tym, które oko przeszło transplantację lub czy ocena była przedoperacyjna czy pooperacyjna. Hodowla i wytwarzanie autologicznych doustnych błon śluzowych komórek nabłonka
Ryc. 1. Ryc. 1. Transplantacja autologicznych tkankowych arkuszy nabłonkowych tkanek wytworzonych z nabłonka błony śluzowej jamy ustnej. Panel A pokazuje usuwanie ustnej tkanki śluzówki (3 na 3 mm) z policzka pacjenta. Wyizolowane komórki nabłonkowe są wysiewane na wstawki do hodowli komórkowych reagujące na temperaturę. Po dwóch tygodniach w temperaturze 37 ° C komórki te rosną, tworząc wielowarstwowe arkusze komórek nabłonkowych. Żywy arkusz komórek zbiera się z nienaruszonymi połączeniami komórka-komórka i macierzą pozakomórkową w przeszczepialnej postaci po prostu przez obniżenie temperatury hodowli do 20 ° C przez 30 minut. Arkusz komórek jest następnie przeszczepiany bezpośrednio do chorego oka bez szwów. W panelu B (pasek skali przedstawia 50 .m), zebrane arkusze komórek mają od trzech do pięciu warstw komórek i nie przypominają oryginalnej błony śluzowej jamy ustnej, jak pokazano w Panelu C (pasek skali reprezentuje 100 .m) tak blisko, jak przypominają normalny nabłonek rogówki jak pokazano w Tablicy D (pasek skali reprezentuje 100 .m). Panel E pokazuje transmisyjną mikrografię elektronową opracowanych mikrokosmków na wierzchołkowej powierzchni arkusza komórek. Próbki tkanek komórek nabłonka tkanek modyfikowane przez obniżenie temperatury hodowli są wybarwione na zielono przeciwciałami przeciw keratynie 3 (Panel F), przeciwciałami przeciwko integrynie .1 (Panel G) i przeciwciałami anty-p63 (Panel H ). Jądra w panelach F, G i H są przedstawione na czerwono. Paski skali reprezentują 50 .m w panelach F, G i H. Próbki w panelach B, C i D są wybarwione hematoksyliną i eozyną.
Po wysterylizowaniu jamy ustnej każdego pacjenta za pomocą miejscowego jodku powidonu, wycinek 3-na-3 mm tkanki śluzówkowej wycięto chirurgicznie z wnętrza nabłonka błony śluzowej, podczas gdy pacjent poddano znieczuleniu miejscowemu ksylokainą (Figura 1A). Doustne komórki nabłonka śluzówki zebrano przez usunięcie wszystkich warstw nabłonka po traktowaniu dispase II (3 mg na mililitr, Roche), w 37 ° C przez jedną godzinę. Zebrane materiały umieszczono w trypsynie i EDTA na 15 minut z wytworzeniem zawiesin pojedynczych komórek. Wrażliwe na temperaturę wkładki do hodowli komórkowej (CellSeed) przygotowano z użyciem komercyjnych wkładek do hodowli komórkowych (Falcon, Becton Dickinson) zgodnie ze specyficznymi procedurami opisanymi powyżej.22 Poli (N-izopropyloakryloamid) reagujący na temperaturę, który odwracalnie zmienia się. jego właściwości hydratacyjne wraz z temperaturą są chemicznie unieruchamiane w cienkich warstwach na powierzchniach komórek, ułatwiając przyleganie komórek i wzrost w normalnych warunkach hodowli w 37 ° C. Zmniejszenie temperatury hodowli poniżej 30 ° C powoduje, że powierzchnia ta ulega hydratacji i szybko pęcznieje, co powoduje całkowite oderwanie adherentnych komórek bez użycia typowych enzymów proteolitycznych lub leczenia EDTA. Konfluentne hodowle komórkowe na tych powierzchniach można wygodnie zebrać jako pojedynczą, niepodpartą przyległą warstwę komórek, zachowując połączenia między komórkami, a także osadzając pozakomórkową macierz na podstawowej powierzchni arkusza.23 Zbiory wolne od enzymów umożliwiają arkusze komórek do łatwo manipulować, przenosić, układać warstwami lub wytwarzać, ponieważ szybko przylegają do innych powierzchni, takich jak tradycyjne tworzywa sztuczne, 22 inne arkusze komórek i tkanki in vivo.
Aby przygotować potraktowane śmiertelnie warstwy odżywcze, subkonfluentne komórki NIH 3T3 inkubowano z 16 .g mitomycyny C na mililitr przez dwie godziny w 37 ° C, a następnie trypsynizowano i wysiano na dołki do hodowli tkankowej (średnica 35 mm, Becton Dickinson) w gęstości 2 x 104 komórek na centymetr kwadratowy
[przypisy: specjalizacje lekarskie warszawa, kruczenie w jelitach, dwunastnica położenie ]
[więcej w: kłykciny kończyste objawy, kminek właściwości, kobalamina ]

0 thoughts on “Rekonstrukcja rogówki z wytworzonymi tkankami arkuszy komórek składających się z autologicznego doustnego nabłonka błony śluzowej cd”