Skip to content

otłuszczona wątroba co to jest

4 miesiące ago

754 words

Do rejestracji kinetyki enzymu wykorzystano spektrofotometr o podwójnej długości fal Aminco DW-2. Badania immunofluorescencji w komórkach IMCD3. Komórki hodowano na 24-studzienkowych szklanych dnie płytek, barwiono Mitotracker Red CMTMRos (250 nM) (Invitrogen) przez 30 minut w 37 ° C w 5% CO2 i utrwalano 4% paraformaldehydem. W przypadku pośrednich badań immunofluorescencyjnych utrwalone komórki permeabilizowano za pomocą 0,1% Triton / 1% BSA / PBS, pH 7,4 i barwiono pierwszorzędowymi przeciwciałami przez godzinę w 25 ° C, a następnie immunolabelizowano przeciwciało wtórne. Jądra były barwione kontrastowo przy pomocy Hoechst (Invitrogen). Obrazy z mikroskopii epifluorescencyjnej uzyskano przy użyciu Zeiss AxioObserver.Z1, z obiektywem o liczbowej aperturze 63 x 1,4 i kamerą CCD Hamamatsu ORCA-ER, ze zdjętymi stosami obrazu (0,5-. M etapów) dekonvolved i odpowiednimi obrazami komórki z- rzutowane, za pomocą oprogramowania AxioVision 3.1 (Zeiss). Histologia nerek i immunofluorescencja. Ludzkie biopsje nerki zostały utrwalone w roztworze Dusbosq-Brasil i osadzone w parafinie; Skrawki 2- do 6- m wybarwiono hematoksyliną-eozyną, PAS, srebrem metenaminowym PAS, trichromem Massona i czerwienią Kongo do rutynowej diagnostyki. Immunofluorescencję odcinków nerki szczura przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (50). Oczyszczanie białek i spektrometria masowa. Ortolog E. coli XPNPEP3, ecAPP, wklonowano do wektora pET28a (Novagen) w celu ekspresji białka fuzyjnego z znacznikiem His na końcu N. Powstały konstrukt transformowano do kodonu BL21 (DE3) E. coli plus RIL (Stratagene). Po indukcji IPTG, ECAPP oczyszczono przy użyciu technologii Ni-NTA (Qiagen). Peptydy 9-aminokwasowe identyczne z N-końcami NPHP6, ALMS1, LRRC50 i dyneiny bez metioniny zostały zsyntetyzowane przez Genscript. W typowej reakcji enzymatycznej substrat peptydowy 100 (3 M inkubowano ze 100 nM oczyszczonym ecAPP, który był wstępnie aktywowany 20-krotnym nadmiarem MnCl2 w 20 mM Tris-HCl, pH 7,4, (0,75 mM MnCl2). Reakcję przerwano przez gotowanie próbek w 100 ° C przez 5 minut, a produkt wykryto za pomocą ESI-LC-MS (Agilent Technologies). Substraty rozszczepienia kandydatów zidentyfikowano z bazy danych Protein Ciało (http://ciliaproteome.org). Ratowanie fenotypów gastrulacji u danio pręgowanego. MO (Narzędzia Gene) skierowane na reio ortologa Danio XPNPEP3 lub LRRC50 ponownie zawieszono do odpowiednich stężeń, stosując jałową wodę dejonizowaną i wstrzyknięto do zarodków WT w stadium 2-komórkowym. Aby uratować fenotypy morfantne w połowie somalijskich, wygenerowaliśmy ograniczone mRNA dla monopierwiastków MO, wykorzystując zlinearyzowany pCS2 + XPNPEP3 (pełnej długości lub A N N-XPNPEP3) lub pCS2 + LRRC50 (WT lub mutanty) jako matrycę do transkrypcji mRNA z zestawem mMachage mMachine SP6 ( Ambion). Badania ratunkowe xpnpep3 przeprowadzono przy użyciu 4 ng blokera translacji MO i 50 pg mRNA. W badaniach ratunkowych dla lrrc50, 4,5 ng blokera translacji lrrc50 MO złożono wspólnie z 150 pg RNA. Fenotypy żołądka oceniano na 10-tym stuleciu. Statystyka. Do oceny fenotypów knockdown dla danio pręgowanego zastosowano test Pearsona A 2; Wartości P mniejsze niż 0,05 uznano za znaczące (Figura 6). Domniemane cele żółciowe XPNPEP3 zostały uszeregowane przy użyciu oczekiwanych wartości (Tabela dodatkowa 8). Materiały uzupełniające Zobacz Dodatkowe dane Podziękowania Serdecznie dziękujemy pacjentom i ich rodzinom za udział. Uznajemy RH Lyons za doskonałe sekwencjonowanie na dużą skalę i Jun Zhonga za pomoc techniczną w analizie spektrometrii mas. Jesteśmy wdzięczni następującym współpracownikom za pomoc w dyskusji na temat innych modeli zwierzęcych i systemów biologicznych: Jan Smeitinck (Nijmegen, Holandia), Dontscho Kerjaschki (Wiedeń, Austria), Mark Winey i Chandra Kilburn (University of Colorado), Keith Gull (Oxford, Wielka Brytania) i Michel Leroux (Burnaby, Kanada) Badania te zostały wsparte dotacjami z NIH (DK1069274, DK1068306 i DK064614 na F. Hildebrandta, R01HD04260, R01DK072301 i R01DK075972 na N. Katsanis, DK079541 na EE Davis), Macular Vision Research Foundation (na N. Katsanis), oraz Fundacja na rzecz Walki z Ślepotą (do N. Katsanis) i przez stypendium NRSA F32 DK079541 (do EE Davis) z Narodowego Instytutu Cukrzycy, Trawienno-Nerwowych. F. Hildebrandt jest badaczem Instytutu Medycznego Howarda Hughesa, Doris Duke Distinguished Clinical Scientist oraz Frederick GL Huetwell Professor. H. Khanna był wspierany przez grant NIH EY007961 oraz grant Fundacji Walki z Ślepotą. LM Quarmby był wspierany przez kanadyjskie instytuty zdrowia i badań (MOP-378061). JF O. Toole był wspierany przez dotację z NIH (DK071108). J. Uusimaa był wspierany przez Fińską Fundację Medyczną, Fundację Alma i KA Snellman oraz Fundację Sigrid Juselius. Prace te były również wspierane przez niemiecką niemiecką sieć na rzecz zaburzeń mitochondrialnych finansowaną przez Bundesministerium für Bildung und Forschung (mitoNET 01GM0862) oraz systemy biologii metabotypów (SysMBo 0315494A). Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Cytat za ten artykuł: J Clin Invest. 2010; 120 (3): 791. 802. doi: 10.1172 / JCI40076. Zobacz powiązany artykuł w Światła włączone dla aminopeptydazy w torbielowatej chorobie nerek.
[patrz też: lepiej późno niż później cda, kobalamina, kaspofungina ]

0 thoughts on “otłuszczona wątroba co to jest”