Skip to content

lekarz stomatolog gdańsk

4 miesiące ago

667 words

Zgodnie z literaturą, fibroblasty wyrażały ~ 2MR, podczas gdy HUVEC nie (Figura 4A) (20). Linia komórkowa ARPE-19 eksprymowała. 2MR na niskich poziomach (Figura 4A). Chociaż komórki Farage nie eksprymowały. 2MR, szybko nabrały C3 (MA), wskazując, że pobieranie nie odbywa się wyłącznie za pośrednictwem tego receptora. Aby scharakteryzować wychwyt oparty na 2MR na fibroblastach, receptor blokowano rosnącymi stężeniami mAb przed dodaniem C3 (H2O) do pożywki hodowlanej. Nawet w przypadku fibroblastów eksprymujących .MMR i przy wszystkich stężeniach mAb wykryliśmy jedynie niewielki spadek (~ 15%) w wychwycie C3 (H2O) (Figura 4B). Podsumowując, dane te silnie wspierają niezależny od mechanizmu 2MR mechanizm pobierania. Figura 4 – niezależny od 2MR wychwyt C3. (A) Analiza ekspresji a2MR we wskazanych liniach komórkowych za pomocą cytometrii przepływowej. Histogram wypełniony szarym kolorem, kontrola izotypowa; czerwony histogram, anty-2MR. Wyniki są reprezentatywne dla 2 niezależnych eksperymentów. (B). 2MR był blokowany na fibroblastach ze wskazanymi stężeniami mAb anty-2 2MR (. G / ml) przed inkubacją z 10% NHS (ścieżki 5. 8). C3, 10 ng (linia 1); 2,4 x 105 równoważników komórek (ścieżki 2. 8). Wyniki są reprezentatywne dla 3 niezależnych eksperymentów. Następnie staraliśmy się zidentyfikować receptor, który pośredniczy w wychwycie. Rozważyliśmy kilka innych potencjalnych receptorów i białek regulatorowych, w tym receptory dopełniacza, które wiążą C3b i C3 (H2O). Aby konkurencyjnie hamować wiązanie, zastosowaliśmy strategię, w której osobno preinkubowaliśmy komórki z mAb do każdego białka przed załadowaniem C3 (H2O). Oceniliśmy wychwyt w lizatach komórkowych według WB. W szczególności wykorzystaliśmy mAb do hamowania wiązania za pomocą CD46 (znanego również jako białko kofaktorowe błony [MCP]), receptora dopełniacza (CR1), receptora 2 dopełniacza (CR2) i receptora dopełniacza 3 (CR3) (Suplementowa Figura 4, B i DO). Oprócz znanych białek wiążących C3b, zablokowaliśmy sortilinę, która ma wspólne ligandy z rodziną genów LDLR (tj.. 2MR) (dodatkowa figura 4D). W każdym przypadku wychwyt był porównywalny do tego w grupie kontrolnej. Tak więc powyższe białka kandydujące nie są odpowiedzialne za ładowanie C3 (H2O). C3 (H2O) zawraca do wnętrza komórki. Ponieważ zauważyliśmy malejące ilości C3 (H2O) w PBC, widocznie w zależności od długości czasu usuniętego ze źródła C3, byliśmy zainteresowani oceną, jak długo takie obciążone magazyny C3 (H2O) były utrzymywane wewnątrzkomórkowo. Aby ustalić parametry ładowania C3 (H2O), najpierw zbadaliśmy wielkość wychwytu. Po 1-godzinnej inkubacji komórki Farage były nasycane około 15 ng C3 (H2O) na 105 komórek (Figura 5A). Następnie zbadaliśmy przebieg czasowy pobierania C3 (H2O). Komórki Farage naładowały C3 (H2O) szybko, przy czym C3 (H2O) wykryto w lizatach komórkowych po wystawieniu na działanie C3 (MA) przez nawet minutę (Figura 5B). W celu zbadania kinetyki strat komórki Farage (Figura 5C) i komórki Jurkat (Figura 5E) załadowano C3 (H2O), przemyto i wysiano na pożywce hodowlanej zawierającej FBS we wskazanych punktach czasowych. W każdym punkcie czasowym zbierano supernatanty i przygotowywano lizaty komórkowe, a następnie analizowano przez WB z króliczym anty-C3a pAb. Chociaż kinetyka różniła się w zależności od typu komórki, komórki Farage (Figura 5C), Jurkat (Figura 5D) i ARPE-19 (Figura 5E) wykazywały szybkie wyczerpywanie zinternalizowanych zapasów C3 (H2O). Następnie oceniliśmy, czy utrata C3 (H2O) była spowodowana degradacją, uwolnieniem lub ich kombinacją. Supernatanty z opisanych powyżej komórek Farage oceniano za pomocą WB. Co ciekawe, wzrost C3 w supernatancie komórek Farage uprzednio obciążonych C3 z grubsza odpowiadał utracie C3 w lizatach komórkowych (porównaj Fig. 5F i Figura 5C). Supernatanty z komórek Farage nieobciążonych C3 zawierały znacznie mniejsze ilości C3, które były minimalnie, jeśli w ogóle, zmienione w czasie (Figura 5F), tym samym ustalając, że C3 wykryte w supernatantach z obciążonych komórek nie pochodziło z biosyntezy
[przypisy: jarmuż właściwości, kalprotektyna, klasterowe bóle głowy ]

0 thoughts on “lekarz stomatolog gdańsk”