Skip to content

laserowe zamykanie naczynek kraków cena

2 miesiące ago

632 words

Sekwencje dla RNA typu dzikiego, SRSF-1, A SRSF-2, A SRSF-3, ARSRSF-2/3 i kontrolnego (wymieszanego) opisano w Tabeli dodatkowej 1. Wyznakowane cząsteczki RNA inkubowano z 50 | jl przemytych kulek magnetycznych streptawidyny (Dynabeads M-270, Life Technologies) w buforze do wychwytywania RNA (20 mM Tris [pH 7,5], M NaCl, mM EDTA i 0,1% Tween-20) w temperaturze pokojowej przez 30 minut. minuty. Kulki przemyto dwukrotnie buforem do płukania (20 mM Tris [pH 7,5] 0,1% Tween-20) i jednokrotnie buforem wiążącym białka (20 mM Tris [pH 7,5], 150 mM NaCl, 20 mM MgCl2 i 0,5% Tween-20). Kulki inkubowano z 60 .g ekstraktu białka jądrowego w buforze wiążącym białka, zawierającym 100 jednostek inhibitora SUPERASE-In RNase (Life Technologies) w 4 ° C przez 60 minut. Ekstrakty jądrowe wytworzono z komórek HEK293 poddanych elektroporacji za pomocą wektora ekspresyjnego HA-SRSF2 (42) przy użyciu odczynnika do ekstrakcji NE-PER (Life Technologies) zawierającego proteazy (Life Technologies) i fosfatazę (Biotool). Kulki przemyto 6 razy buforem do płukania (20 mM Tris [pH 7,5], 10 mM NaCl, 0,1% Tween-20), a związane białka wymywano przez inkubację w buforze do próbek białka w temperaturze 70 ° C przez 10 minut. Białka rozdzielano na żelach poliakrylamidowych 4% do 12% Bis-Tris SDS, a SRSF2 wykrywano metodą blottingu Western z mysim przeciwciałem monoklonalnym przeciwko znacznikowi HA (ab18181, Abcam). Obciążenie żelu białkowego doprowadzono do ilości biotynylowanego RNA w eluacie, co zmierzono inkubując ze znakowaną Alexa Fluor 680f streptawidyną (S-21378, Life Technologies) i określając ilościowo sygnał za pomocą skanera podczerwieni Odyssey (LI- COR Biosciences). Leczenie myszy za pomocą ASO. Myszy (typu dzikiego lub LmnaG609G / G609G) wstrzyknięto dootrzewnowo E11-31 lub zaszyfrowaną ASO (w normalnym roztworze soli fizjologicznej) w stężeniu 150 mg / kg / tydzień (podzielono na 2 iniekcje na tydzień). Zwierzęta uśmiercono 2 dni po ostatnim zastrzyku i tkanki zebrano do analizy. Efekty E11-31 na poziomach transkryptu kwantyfikowano za pomocą qRT-PCR, a wpływ na poziomy białka w laminacie określono przez ilościową analizę Western blotting. W przypadku myszy LmnaG609G / G609G aorty oczyszczono bez wydzielania, a łuk aorty poddano obróbce w kierunku Western blotting, podczas gdy odcinek aorty wstępującej zebrano do zatopienia w parafinie i barwienia H & E. Statystyka. Analizy statystyczne wykonano za pomocą programu Microsoft Excel 2011 dla komputerów Mac. Różnice poziomów ekspresji laminatu A, laminatu C i progeriny we wszystkich doświadczeniach analizowano za pomocą dwustronnego testu ucznia. Różnice w liczbie nienormalnie ukształtowanych jąder analizowano za pomocą testu P2. Zatwierdzenie badania. Badanie to przeprowadzono zgodnie z wytycznymi zawartymi w Przewodniku po opiece i stosowaniu zwierząt laboratoryjnych w National Institutes of Health (wyd. 8, National Academy Press., 2011). Komitet Badań nad Zwierzętami UCLA zatwierdził wszystkie procedury przeprowadzane na zwierzętach. Autorstwo badań Zaprojektowane badania JML, HJJ, SGY i LGF. JML, CN, YT, CC, SHY i LGF przeprowadziły eksperymenty. TAV, FR i CFB dostarczyły odczynniki. JML, SGY i LGF napisały manuskrypt. Materiały uzupełniające Zobacz Uzupełnienia danych Podziękowania Ta praca została wsparta dotacjami od NIH (HL089781 i AG047192 na LG Fong i AG035626 na SG Young). Chcielibyśmy podziękować Thomasowi A. Cooperowi (Baylor College of Medicine, Houston, Texas, USA) za dostarczenie plazmidu reporterowego RHCglo i Junko Oshima (University of Washington, Seattle, Washington, USA) za dostarczenie linii komórkowych hTERT-HGPS 75- 8 i AG03513D. Chcielibyśmy również podziękować Tiffany Dang i Kara Hamamoto w liczeniu zarodków. Przypisy John M. Obecny adres Lee to: CHI St. Luke s Episkopalny Szpital, Houston, Texas, USA. Konflikt interesów: SG Young uzyskał dochód od eksperta i był ekspertem od Regeneron. TA Vickers, F. Rigo i CF Bennett są płatnymi pracownikami Ionis Pharmaceuticals. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2016; 126 (4): 1592-1602. doi: 10.1172 / JCI85908. Zobacz powiązany artykuł w dziale Welcome for the epice splicing: antysensowne oligonukleotydowe pomijanie eksonów zyskuje szersze zastosowanie.
[patrz też: kardiowersja elektryczna, jarmuż właściwości, lepiej późno niż później cda ]

0 thoughts on “laserowe zamykanie naczynek kraków cena”