Skip to content

ginekolog ściana łomża

3 miesiące ago

239 words

Powoduje to niemożność wykrycia różnicy w pobraniu w porównaniu z C3 (MA). Dane te potwierdzają wniosek, że C3 (H2O), a nie natywny C3, jest preferencyjnie ładowany do komórek. Istnieje dramatyczna zmiana konformacyjna w przypadku Tickover od C3 do C3 (H2O) (17. 19). Tak więc, co ważne, wskazuje to na wychwytywanie za pośrednictwem mechanizmu, który specyficznie rozpoznaje konformację C3 (H2O). Rysunek 2 Obciążenie C3 (H2O) jest specyficzne. Pobranie C3 (H2O) w stosunku do natywnego C3 zbadano przez inkubację komórek Farage z (A) 20 (ag / ml dostępnego w handlu preparatu C3 (C3) lub świeżo oczyszczonego preparatu C3 (świeżego C3) lub (B) 5. G / ml dostępne w handlu C3 lub C3 (MA). Lizaty komórkowe przygotowano i analizowano pod kątem wychwytu przez WB. GAPDH, kontrola ładowania. C3, 20 ng (linia 1); lizaty komórkowe, 2,4 x 105 równoważników komórek. (C) Znakowany C3 (C3-DL488) wykorzystano do wizualizacji obciążenia C3 w komórkach i określenia, czy wychwyt jest wrażliwy na współzawodnictwo z nieznakowanym białkiem. Komórki ARPE-19 załadowano przez 5 minut bez (górny panel) lub z (dolny panel, 10-krotne) 2-, 5- lub 10-krotne nadwyżkowe stężenia nieznakowanego C3 (H2O), a następnie C3-DL488 (50. g / ml) przez dodatkowe 15 minut i wizualizowane za pomocą mikroskopii konfokalnej. Oryginalne powiększenie, × 60. Absorpcja C3-DL488 na komórkę jest określona ilościowo w części D. n = 3 reprezentatywne komórki na stan. Niebieski, DAPI; zielony, C3-DL488. * P <0,05 w porównaniu z brakiem nadmiaru nieznakowanego C3 (H2O) przez jednoczynnikową ANOVA z testem wielokrotnego porównania Dunn a. (E) Aby ustalić, czy zdenaturowany C3 (MA) jest internalizowany, komórki Farage inkubowano z 10 .g / ml C3 (MA) lub denaturowanym ciepłem C3 (MA) (hD-C3 [MA]). C3, 30 ng (linia 1); lizaty komórkowe, 4 x 105 równoważników komórek (ścieżki 3. 5). (A, B i E) Bloty reprezentują 2 niezależne eksperymenty. Aby dodatkowo scharakteryzować swoistość wychwytu C3 (H2O), wewnątrzkomórkowe ładowanie C3 (H2O) przez komórki Farage i ARPE-19 wizualizowano przez inkubację komórek za pomocą Dylight 488. Skoniugowanego C3 (C3-DL488) i analizowano za pomocą mikroskopii konfokalnej (Figura 3A). . Po znakowaniu oczyszczonego C3, C3-DL488, takiego jak C3 (H2O), nie zawiera nienaruszonego wiązania tioestrowego, co oceniono za pomocą autolitycznego rozszczepienia (Suplementowa Figura 1B). Komórki ARPE-19 szybko ładowały C3-DL488, a wychwyt mógł być specyficznie hamowany w sposób zależny od dawki przez dodanie wzrastających stężeń nieznakowanego C3 (H2O) do pożywki hodowlanej (Figura 2, C i D). Następnie podgrzewa się zdenaturowany C3 (H2O), który znosi obciążenie, wskazując, że pobieranie C3 (H2O) wymaga jego struktury 3D (rysunek 2E). Następnie wykazaliśmy, że obciążenie ma swoistość gatunkową w tym, że ludzkie linie komórkowe inkubowane z normalną surowicą myszy nie pobierają myszy C3 (suplementowa figura 1C). Biorąc pod uwagę powyższe dane wykazujące swoistość wychwytu dla C3 (H2O) w porównaniu z natywnym C3, wyniki te silnie sugerują, że internalizacja C3 (H2O) zachodzi poprzez specyficzny system rozpoznawania. Figura 3C3 jest zlokalizowana w przedziałach wewnątrzkomórkowych po szybkim wychwycie. (A) Reprezentatywne obrazy z mikroskopii konfokalnej pokazujące, że egzogennie dodany C3 kolokalizuje do wczesnych endosomów. Komórki ARPE-19 inkubowano z C3-DL488 (50 .g / ml, zielony) przez 5 minut, przemyto, a następnie inkubowano przez dodatkowe 1, 15 lub 60 minut w normalnym podłożu wzrostowym. Komórki obciążone C3-DL488p przemywano, utrwalano i permeabilizowano we wskazanych punktach czasowych, a następnie wybarwiano na wczesne endosomy (Rab5, czerwony). Niebieski, DAPI. Reprezentatywne obrazy pochodzą z 3 niezależnych eksperymentów. Oryginalne powiększenie, × 60. (B) C3 jest głównie wewnątrzkomórkowe w świeżo wyizolowanych limfocytach T CD4 + za pomocą cytometrii przepływowej. Ab, koza anty-C3. Szare i czarne histogramy, kontrola izotypowa; czerwony histogram, pozakomórkowy; niebieski histogram, wewnątrzkomórkowy [więcej w: rozpiska na siłownie, lepiej późno niż później cda, klasyfikacja chorób ]

0 thoughts on “ginekolog ściana łomża”