Skip to content

aspiryna jako antykoncepcja

4 miesiące ago

663 words

Dwie linie ludzkich komórek, ARPE-19 i Farage, inkubowano w 10% NHS przez 30 minut, aby ocenić, czy biorą one C3. C3, 30 ng; lizaty komórkowe, 2,4 x 105 równoważników komórek. (C) Komórki Farage inkubowano przez 15 minut z komercyjnie dostępnym oczyszczonym C3 i przepłukano 3 (ścieżka 3), 6 (ścieżka 4) lub 9 (ścieżka 5) przed przygotowaniem lizatów komórkowych. Lizaty komórkowe (panel górny), supernatanty z końcowego płukania (panel dolny). C3, 30 ng; lizaty komórkowe, 2,4 x 105 równoważników komórek; płukać supernatanty, 20 ul (100 ul). Reprezentatywny blot z 4 niezależnych eksperymentów (A i B) lub 2 (C). Główną różnicą między PBC i hodowanymi komórkami jest to, że te ostatnie nie były wystawione na źródło ludzkiego C3 przez wiele pokoleń. Dlatego postawiliśmy hipotezę, że PBC mogą ładować C3 z krwi i / lub syntetyzować i przechowywać C3. W konsekwencji, Farage i ARPE-19, ludzka linia komórek nabłonka siatkówki, inkubowano z 10% prawidłową ludzką surowicą (NHS) i oceniano dla C3 przez WB. Zgodnie z oczekiwaniami, linie komórkowe Farage i ARPE-19 hodowane w standardowych warunkach hodowli nie zawierały wykrywalnego natywnego pasma C3 przy 190 kDa (Figura 1B). Jednak zgodne z naszym. Loading. hipoteza, po krótkiej ekspozycji na 10% NHS, komórki Farage i ARPE-19 wykazywały pasmo odpowiadające C3 (Figura 1B), identyczne w Mr do C3 obserwowane w pierwotnych limfocytach B (patrz Figura 1A). Te same wyniki zaobserwowano, czy te linie komórkowe były narażone na działanie osocza lub krwi pełnej (Suplementowa Figura 1A, materiał uzupełniający dostępny online z tym artykułem; https://doi.org/10.1172/JCI89412DS1). Aby dodatkowo ocenić, czy C3 ładuje się do komórek, inkubowaliśmy komórki Farage z dostępnym handlowo oczyszczonym ludzkim C3. Podobnie do wyników uzyskanych dla NHS, inkubacja z oczyszczonym C3 wykazała pasmo podobne do C3 (Figura 1C). Aby sprawdzić, czy wykryty C3 nie jest drugorzędny w stosunku do przeniesienia, myliśmy komórki Farage 3, 6 lub 9 razy przed przygotowaniem lizatów. C3 nie rozcieńczało lizatów, nawet po tym, jak było niewykrywalne w supernatantach do płukania (Figura 1C). Zauważ, że, jak pokazano na rysunku 1C, wykorzystaliśmy poliklonalne Ab do C3a, które daje takie same wyniki jak kozie anty-C3 pAb, tj. C3 w komórkach zawiera C3a i to dalej stwierdza, że jest to natywny C3 i / lub lub C3 (H2O). Komórki biorą konkretnie udział w C3 (H2O), a nie w natywnym C3. W przeglądzie literatury znaleźliśmy jeden raport opisujący wewnątrzkomórkowy wychwyt C3 przez receptor P2-makroglobuliny (| 2MR) (15). W tym artykule doniesiono, że P2MR specyficznie pośredniczy w wychwycie C3 (H2O). W warunkach fizjologicznych C3 zamienia się we krwi na około 1% do 2% na godzinę, aby wytworzyć C3 z rozszczepionym wiązaniem tioestrowym (13). Prawie wszystkie z tych przejściowo aktywnych C3 nie są związane z celem, a zatem są dezaktywowane przez połączenie z H2O (C3 [H2O]). Aby ustalić, czy C3 (H2O) było formą internalizowaną w naszych eksperymentach, porównaliśmy wychwyt dostępnego w handlu C3, który przeszedł kilka cykli zamrażania / odmrażania (generuje więcej C3 [H2O]) do C3 świeżo przygotowanego w naszym laboratorium. Wykryliśmy minimalny pobór świeżego. C3 przez komórki Farage (Figura 2A). Aby dodatkowo potwierdzić hipotezę, że C3 (H2O), ale nie natywny C3, została pobrana, porównaliśmy skuteczność wychwytu dostępnego w handlu C3 z C3 inaktywowanym przez traktowanie analogiem metyloaminy C3 (H2O), C3 [MA] literatura 16) . Po inkubacji z 5 .g / ml albo C3 albo C3 (MA), komórki Farage a ładowały około 10 razy więcej C3 (MA) w porównaniu z C3, wskazując, że komórki ładowały inaktywowaną tioester frakcję C3 (Figura 2B). Ponieważ część komercyjnie dostępnego C3 ma postać C3 (H2O), użyliśmy niższego stężenia C3 i C3 (MA), jak pokazano na rysunku 2B, aby upewnić się, że nie osiągnęlibyśmy nasycenia obciążenia C3 przez jego procent jako C3 (H2O)
[patrz też: jak szybko obniżyć ciśnienie, olx grójec, zimbra gratka ]

0 thoughts on “aspiryna jako antykoncepcja”